新三板和老三板在定义、交易制度和参与主体等方面有显著区别：

定义与起源
新三板：全称为“全国中小企业股份转让系统”，主要针对创新型、创业型、成长型的中小微企业的股票交易市场，于2013年正式运营。
老三板：即“代办股份转让系统”，主要服务于原STAQ、NET系统挂牌公司和从沪深交易所退市的公司，成立于2001年。

交易制度与门槛
新三板：交易制度相对灵活，采用做市商制度，允许机构投资者和个人投资者参与，投资门槛相对较低。
老三板：交易制度较为严格，主要服务于退市公司和原STAQ、NET系统挂牌公司，交易门槛较高，参与投资者相对较少。

参与主体
新三板：挂牌公司主要是非公众公司，无需经过公开发行程序，只要符合新三板规定的挂牌条件即可。
老三板：挂牌公司都是公众公司，经过合法的公开发行程序，并且符合我国证券发行资质的相关规定。

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